Elisa

96-dobře microtiter talíř takový jak jeden ukázaný nad sílou být užitý na Elisu.

Enzym-spojený ImmunoSorbent vzorek (Elisa v krátkosti) je biochemická technika používala hlavně v imunologii odhalit přítomnost protilátky nebo antigen ve vzorku. To využije dvě protilátky, jeden z kterého je typický pro antigen a jiný který je připojený k enzymu. Tato druhá protilátka dává vzorek jeho “enzym-spojený” jméno a vůle způsobí chromogenic nebo fluorogenic substrát produkovat signál. Protože Elisa může být vykonávána ocenit jeden přítomnost antigenu nebo přítomnost protilátky ve vzorku, to je užitečný nástroj oba pro určovat sérum koncentrace protilátky (takový jak s Human Immunodeficiency virem, HIV test nebo západní Nil vir) a také pro odhalovat přítomnost antigenu.

Metody

Kroky generála, “nepřímý,” Elisa pro sérum stanovení koncentrace protilátky jsou:

1. Aplikovat vzorek známého antigenu k povrchu, často studna microtiter talíře. Antigen je připevněn k povrchu vyjádřit to nehybný.
2. Studny talíře nebo jiný povrch jsou pak pokrytí sérovými vzorky neznáma koncentrace protilátky, obvykle ředil v dalším séru druhu. Použití nečlověčího séra předejde nespecifickým protilátkám v trpělivé krvi z vázání k antigenu.
3. Talíř je myt, tak ta odvázaná protilátka je odstraněna. Po tomto umytí, jediný protilátka-komplexy antigenu zůstanou spojené se studnou.
4. Druhé protilátky jsou přidány k studnám, který bude vázat k nějakému antigenu-komplexy protilátky. Tyto druhé protilátky jsou připojené k substrátu-modifikovat enzym.
5. Mýt talíř tak tu přemíru odvázané protilátky jsou odstraněny.
6. Aplikovat substrát, který je přeměněn enzymem vylákat chromogenic nebo světélkující signál.
7. Prohlížet si/počítat výsledek používat spectrophotometer nebo jiné optické zařízení.

Enzym se chová jako zesilovač: dokonce jestliže jediný nemnoho enzymu-spojené protilátky zůstanou spojené, molekuly enzymu budou produkovat mnoho signalizují molekuly.

Elisa může být provozována v kvalitativním nebo kvantitativním formátu. Kvalitativní výsledky stanoví jednoduchý pozitivní nebo negativní výsledek pro vzorek. Hranice mezitím pozitivní a zápor je určen analytikem a smět být statistický. Dva nebo třikrát směrodatná odchylka je často používána rozlišovat pozitivní a negativní vzorky. V kvantitativní Elisa, optická hustota nebo světélkující jednotky vzorku je vložen do kalibrační křivky, která je typicky postupné zředění cíle.

Vložit Elisu

Sendvič Elisa. (1) talíř je pokrytý protilátkou zachycení; (2) vzorek je přidán a nějaký dar antigenu váže ke snímací protilátce; (3) odhalovat protilátku je přidán, a váže k antigenu; (4) enzym-spojená druhotná protilátka je přidána, a váže k odhalovat protilátku; (5) substrát je přidán, a je přeměněn enzymem k zjistitelné formě.

Méně-obyčejná varianta této techniky, volal “sendvič” Elisa, je používán objevit antigen vzorku. Kroky jsou takto:

1. Připravit povrch ke kterému známé množství protilátky je svázáno.
2. Aplikovat antigen-obsahovat vzorek k talíři.
3. Umyjte talíř, tak ten odvázaný antigen je odstraněn.
4. Aplikovat enzym-spojené protilátky, které jsou také typické pro antigen.
5. Mýt talíř tak ten odvázaný enzym-spojené protilátky jsou odstraněny.
6. Aplikujte chemikálii, která je přeměněna enzymem do světélkujícího signálu.
7. Prohlížet si výsledek: jestliže to fluoresces, pak vzorek obsahoval antigen.

Soutěživý Elisa

Třetí použití Elisy je přes konkurenční vázání. Kroky pro toto Elisa je poněkud jiná než první dva příklady:

1. Unlabeled protilátka je inkuboval v přítomnosti jeho antigenu.
2. Tito svázali protilátku/antigen komplexy jsou pak přidané k antigenu pokrytý dobře.
3. Talíř je myt, tak ta odvázaná protilátka je odstraněna. (Více antigenu ve vzorku, méně protilátky bude schopné vázat k antigenu ve studně, proto “soutěž.”)
4. Druhotná protilátka, typický pro primární volby protilátka je přidána. Tato druhá protilátka je připojená k enzymu.
5. Substrát je přidán a zbývající enzymy vylákají chromogenic nebo světélkující signál.

Pro soutěživý Elisa, vyšší originál koncentrace antigenu, slabší eventuální signál.